世界衛(wèi)生組織已將甲型H1N1流感警告級別提到5級，強烈顯示即將發(fā)生的大流行。據(jù)世衛(wèi)組織公布，截止于2009年5月13日11點，全球確認甲型H1N1流感5,969例并蔓延28個國家，給各國在緊急預(yù)警和疫情控制方面提出了嚴峻的挑戰(zhàn)。繼香港首例甲型H1N1確診后，5月11日，四川一例甲型H1N1流感疑似病例被確診，5月12日17時，山東報告1例甲型H1N1型流感疑似病例，當日香港發(fā)現(xiàn)一名甲型H1N1流感疑似個案。由于病毒引起的感染癥狀多比較相似，采用常規(guī)方法很難確認感染類型，因此對于甲型H1N1流感的早期快速確診對于有效控制疫情至關(guān)重要。
美國貝克曼庫爾特公司在病毒核酸提取，實驗室自動化和病毒核酸檢測領(lǐng)域有著豐富的經(jīng)驗和完整的解決方案。針對本次甲型H1N1流感疫情，公司已與國家CDC開展合作，根據(jù)世界衛(wèi)生組織最新發(fā)布的H1N1流感病毒序列信息和雙方技術(shù)基礎(chǔ)聯(lián)合開發(fā)甲型H1N1型流感病毒快速診斷方案，并同時開發(fā)包括人流感，禽流感，豬流感，SARS等多種上呼吸道病毒檢測和變異分析標準方案，該方案具有快速、準確、安全、低成本等特點，并可用于流感病毒快速篩查、病毒分型、突變檢測和流行病學研究。
• 病毒核酸安全提取
美國貝克曼庫爾特公司的SPRI-TETM Viral NA提取試劑盒結(jié)合SPRI-TETM自動核酸提取儀，為甲型H1N1流感病毒核酸的提取提供了快速安全的解決方案。SPRI-TETM采用固相載體可逆式磁珠對病毒RNA進行高效抽提，從樣品的裂解到核酸的洗脫都無需人工干預(yù)，將操作者危險性降到最低。SPRI-TETM系統(tǒng)可以一批次提取1-10個樣品，每批次提取時間約30分鐘。
• 特異性引物設(shè)計
根據(jù)WHO已公布甲型H1N1流感序列，美國貝克曼庫爾特公司與國家CDC合作設(shè)計出高特異性PCR擴增引物組。該引物組采用GeXP系統(tǒng)的 eXpress ProfilerTM模塊設(shè)計，包括5對特異性引物，分別為A型流感，H1N1型流感，季節(jié)性流感，甲型H1N1流感和質(zhì)控序列。與常規(guī)PCR引物不同，每對引物5’端均帶有通用引物，5組擴增產(chǎn)物長度范圍在100- 600堿基。
• 甲型H1N1病毒快速檢測
利用貝克曼公司專利的XP-PCR技術(shù)，對5對引物(5對流感病毒特異引物和一對內(nèi)質(zhì)控引物)進行多重擴增( 整個流程由BiomekTM系列自動化工作站完成)。多重PCR產(chǎn)物因長度不同，可經(jīng)過毛細管電泳分離檢測。電泳原始數(shù)據(jù)、樣本信息和基因信息輸入GeXP軟件系統(tǒng)進行分析， 即可得到樣本的病毒檢測報告。
• 病毒分型和變異檢測
在多重病毒監(jiān)測基礎(chǔ)上，利用標準甲型H1N1病毒引物擴增病毒基因組序列，利用GeXP系統(tǒng)的序列分析功能分析病毒變異位點和可能的蛋白質(zhì)序列變異。
該方法可以將常見流感癥狀的可能病原體一次性掃描，確定檢測樣本的感染類型，具有樣本需求低，檢測速度塊，同時可以監(jiān)測病毒的變異狀況。
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