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  盡管在過去十年中有多種新型抗腫瘤療法被開發(fā)，兼?zhèn)錈o創(chuàng)性和全身抗腫瘤能力的化療仍是臨床中腫瘤治療的主要方法，但目前化療的療效還很不理想。此外，免疫抑制的腫瘤微環(huán)境（TME）也會(huì)限制化療的療效，導(dǎo)致腫瘤易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。因此，探索可有效誘導(dǎo)腫瘤免疫原性的新化療靶點(diǎn)，激活免疫系統(tǒng)并逆轉(zhuǎn)TME的免疫抑制性，有望實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的治療效果。

  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為細(xì)胞中調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)折疊和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要細(xì)胞器，已成為新的藥理學(xué)靶點(diǎn)。由于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞都處于非致命的持續(xù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)，放大內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。此外，當(dāng)腫瘤中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度異常增強(qiáng)時(shí)，定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的免疫原性死亡（ICD）標(biāo)志物鈣網(wǎng)蛋白（CRT）會(huì)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜，熟化樹突細(xì)胞（DCs）。因此，利用可放大內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的藥物促進(jìn)CRT在細(xì)胞表面的暴露，可能是提升腫瘤免疫原性的理想選擇。

  近年來，基于“one-for-all”策略設(shè)計(jì)的兼?zhèn)湓\斷和治療功能的納米藥物被廣泛開發(fā)用于影像引導(dǎo)的腫瘤治療。例如第三代含磷樹狀大分子銅絡(luò)合物（1G₃-Cu），既可將促凋亡蛋白Bax轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；還可利用Cu進(jìn)行MR成像。此外，1G₃-Cu對(duì)線粒體的潛在損傷可能導(dǎo)致另一種ICD標(biāo)志物三磷酸腺苷（ATP）的釋放，進(jìn)一步增強(qiáng)ICD效應(yīng)。

  由于化療藥物往往受困于生物利用度差、單藥療效不足等缺點(diǎn)，具有優(yōu)異載藥能力的TME響應(yīng)納米平臺(tái)被用于整合不同的藥物以提高療效。在眾多納米平臺(tái)中，響應(yīng)性聚合物膠束由于可負(fù)載疏水藥物、延長(zhǎng)血液循環(huán)時(shí)間以及控制藥物釋放等而具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。然而，體內(nèi)的多重生理屏障仍會(huì)阻礙膠束在腫瘤中的積累，因此有必要在膠束表面進(jìn)行額外的仿生修飾以增強(qiáng)其腫瘤特異性。例如，具有免疫逃避性和同源靶向性的癌細(xì)胞膜可使納米平臺(tái)逃脫網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬并增強(qiáng)其在腫瘤中的積累�？紤]到對(duì)腫瘤的高效化療可能會(huì)引起腫瘤細(xì)胞表面免疫檢查點(diǎn)分子表達(dá)增加，將化療與免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB）療法結(jié)合將有望逆轉(zhuǎn)免疫抑制的TME并產(chǎn)生長(zhǎng)期抗腫瘤免疫記憶效應(yīng)。

圖1. GCT@CM NPs的合成及應(yīng)用示意圖。

圖2.（A）GCT NPs的TEM圖；GCT@CM NPs的（B）SEM圖及（C）TEM圖；（D）CD47蛋白的保留情況；（E）各材料的抗蛋白吸附能力；各材料的（F）水合粒徑及（G）電勢(shì)；（H）GCT@CM NPs在水、PBS以及培養(yǎng)基中的粒徑變化曲線；（I）不同條件下GCT@CM NPs粒徑的變化；（J）不同條件下Toy的累積釋放曲線。

圖3.不同材料處理（A）B16細(xì)胞或（B）L929細(xì)胞后的細(xì)胞活力圖；（C）不同材料處理B16細(xì)胞和RAW 264.7細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)銅元素含量分析圖；（D）不同材料處理后B16細(xì)胞內(nèi)GSH水平分析圖及（E-G）ROS水平分析圖；（H）Toy在細(xì)胞內(nèi)的作用機(jī)制示意圖；（I-L）不同材料處理后B16細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因的表達(dá)水平及（M）相關(guān)蛋白的Western blot試驗(yàn)結(jié)果圖。

圖4.（A）1G₃-Cu在細(xì)胞內(nèi)的作用機(jī)制示意圖；（B）不同材料處理后B16細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位變化分析圖；（C-D）不同材料處理后B16細(xì)胞凋亡情況流式分析及（E）凋亡相關(guān)蛋白的Western blot試驗(yàn)結(jié)果圖；（F）B16細(xì)胞與各組材料共孵育引起ICD，并刺激DCs熟化的示意圖；不同材料處理后細(xì)胞內(nèi)（G）HMGB-1的釋放及（H）CRT表達(dá)情況分析圖；（I）各組材料刺激DCs熟化的流式分析圖。

  隨后，研究團(tuán)隊(duì)在小鼠體內(nèi)構(gòu)建了B16皮下瘤模型，通過MR成像驗(yàn)證了GCT@CM NPs在體內(nèi)具有腫瘤主動(dòng)靶向性及延長(zhǎng)的血液循環(huán)時(shí)間。在體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，GCT@CM NPs具有最佳的腫瘤抑制效果，可在體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生ICD，并招募細(xì)胞毒性T細(xì)胞進(jìn)入TME。進(jìn)一步將GCT@CM NPs與PD-L1抗體（Anti-PD-L1）聯(lián)合使用發(fā)現(xiàn)，Anti-PD-L1可提高T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力，使GCT@CM NPs+Anti-PD-L1組小鼠的腫瘤體積最�。▓D5A-E）。經(jīng)流式分析發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療使小鼠脾臟及腫瘤浸潤(rùn)的CD4⁺、CD8⁺T細(xì)胞比例顯著上升，腫瘤部位Tregs的比例下降，免疫抑制的TME被逆轉(zhuǎn)，表明化療引起的ICD與ICB療法聯(lián)合可引起最有效的免疫應(yīng)答（圖5F-K）。 

圖5.（A）小鼠體內(nèi)聯(lián)合治療過程示意圖；不同材料治療14天內(nèi)（B）相對(duì)腫瘤體積變化圖、（C）小鼠相對(duì)體重變化圖及14天后的（D）腫瘤照片和（E）腫瘤重量；各實(shí)驗(yàn)組經(jīng)治療14天后，（F）脾臟及（G）腫瘤組織中CD8⁺與CD4⁺T細(xì)胞分型的流式細(xì)胞分析圖及（H-I）腫瘤組織中Tregs的表達(dá)水平分析；（J）CD8⁺T細(xì)胞與Tregs的比值；（K）治療后各組小鼠血清中IFN-γ表達(dá)水平分析。

圖6.（A）小鼠體內(nèi)腫瘤再挑戰(zhàn)及抗轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)示意圖；（B-C）經(jīng)聯(lián)合治療后各組小鼠脾臟中記憶T細(xì)胞比例分析；（D）各組小鼠再挑戰(zhàn)腫瘤中T細(xì)胞分型分析及（E）CD8⁺與CD4⁺T細(xì)胞的比值；（H）各組小鼠經(jīng)治療后抗轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  簡(jiǎn)而言之，該研究設(shè)計(jì)的GCT@CM NPs納米平臺(tái)具有多個(gè)優(yōu)勢(shì)：1）構(gòu)建的NPs聯(lián)合CM顯著提高了1G₃-Cu和Toy的生物利用度并降低了它們的副作用，使1G₃-Cu和Toy在TME中響應(yīng)性釋放，從而通過線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激兩個(gè)途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；2）Toy介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激放大可以與1G₃-Cu誘導(dǎo)的線粒體功能障礙協(xié)同作用，增強(qiáng)ICD效應(yīng)，熟化DCs并招募免疫細(xì)胞進(jìn)入TME；3）GCT@CM NPs與Anti-PD-L1聯(lián)合使用，可產(chǎn)生長(zhǎng)期免疫應(yīng)答，抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。本研究制備的GCT@CM NPs為整合不同的治療靶點(diǎn)以實(shí)現(xiàn)化療增強(qiáng)的免疫治療提供了新的思路。

  文章鏈接：https://doi.org/10.1002/adma.202206861