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殼聚糖酶酶解機(jī)制研究獲新進(jìn)展
2016-07-22  來源:中國聚合物網(wǎng)
關(guān)鍵詞:殼聚糖 殼寡糖
  殼寡糖是殼聚糖經(jīng)降解處理后得到的一種聚合度為2-20的氨基寡糖產(chǎn)品,具有水溶性好、易吸收等優(yōu)點(diǎn),為目前所知的唯一堿性寡糖,具有抗腫瘤、抗菌、免疫激活以及保濕等特點(diǎn),在醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。殼聚糖酶(chitosanase, EC 3.2.1.132)能特異性催化殼聚糖水解產(chǎn)生殼寡糖,催化條件溫和,并具有較高的催化速率,有利于實(shí)現(xiàn)殼寡糖的綠色工業(yè)化生產(chǎn)。殼聚糖酶屬于多個(gè)糖苷水解酶家族,其中以GH-46家族的殼聚糖酶的研究最為詳細(xì),而對(duì)其他家族的殼聚糖酶了解甚少。GH-8家族殼聚糖酶與GH-46家族殼聚糖酶擁有類似的底物催化機(jī)制,但二者的晶體結(jié)構(gòu)有明顯的不同,且來源于不同的進(jìn)化途徑。 

  中科院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所宋江寧研究員帶領(lǐng)的結(jié)構(gòu)生物信息學(xué)與整合系統(tǒng)生物學(xué)研究組針對(duì)GH-8家族的殼聚糖酶的底物識(shí)別進(jìn)行了一系列深入研究。該研究從殼聚糖酶的晶體結(jié)構(gòu)入手,對(duì)其底物識(shí)別中心的關(guān)鍵氨基酸殘基進(jìn)行鑒定,并通過序列對(duì)比發(fā)現(xiàn)第318位Asp氨基酸高度保守;將Asp318進(jìn)行定點(diǎn)突變?yōu)锳sn,Ala,Glu,Arg或Lys后,發(fā)現(xiàn)除D318N突變體外,其他的酶突變體活性均有明顯喪失。進(jìn)一步的酶動(dòng)力學(xué)分析發(fā)現(xiàn),突變體對(duì)底物的親和性明顯降低。分子內(nèi)相互作用分析表明,Asp318通過與Tyr273之間的氫鍵間接作用于底物,除了D318N突變體外,其他突變體都丟失了與Tyr273發(fā)生相互作用的氫鍵,從而影響了底物與酶的有效結(jié)合。本研究加深了對(duì)GH-8家族殼聚糖酶酶解機(jī)制的了解,為殼聚糖酶的分子改造及工業(yè)化應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 

  該研究得到中國科學(xué)院“百人計(jì)劃”(擇優(yōu))、中國科學(xué)院知識(shí)創(chuàng)新工程項(xiàng)目(KSCX2-EW-G-8)和天津市重大科技攻關(guān)項(xiàng)目(10ZCKFSY05600)的資助。研究結(jié)果發(fā)表在SCI雜志Applied Biochemistry and Biotechnology上,中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所助理研究員周站平為論文第一作者。 


  原文鏈接:http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12010-016-2159-8

Asp318及其突變體與周圍氨基酸之間的相互作用 

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